产品货号：
KD2109
中文名称：
DiO(细胞膜绿色荧光探针)
英文名称：
DiO perchlorate(3,3-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate)
产品规格：
10mg|25mg
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
CAS号：34215-57-1
分子式：C53H85ClN2O6
分子量：881.70
纯度：＞97%
保存：-20℃
产品描述：
DiO是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。进入细胞膜后，DiO在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，被激发后可以发出绿色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。可以用标准的FITC滤光片检测。
DiO通常不会明显影响细胞的生存力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
使用方法
1.染色液制备
(1)配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5mM。
【注】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
(2)工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5μM的工作液。
【注】工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。
2.悬浮细胞染色
(1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
(2)37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
(3)孵育结束，按1000～1500rpm离心5min。
(4)倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
(5)重复(3)，(4)步骤两次以上。
3.贴壁细胞的染色
(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
(5)吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
4.显微镜检测
(1)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
(2)多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
5.流式细胞仪检测
经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。
注意事项
1)荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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